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1、1、 名词解释：1 【生化技术】在生物化学及其相关学科应用的各种技术统称为生化技术。主要指生物体内物质及其代谢产物，特别是生物大分子如蛋质、核酸的分离、检测、制备与改造技术。2 【抽提】是指用适当的溶液（如缓冲液、稀酸、稀碱或有机溶剂如丙酮、乙醇）进行反复萃取，逐步将原料中有效成分最大限度分离出来的过程。3 【有机溶剂沉淀法】利用与水互溶的有机溶剂(如甲醇、乙醇、丙酮等)能使蛋白质在水中的溶解度显著降低而沉淀的方法，称为有机溶剂沉淀。其原因有二，一是具有脱水作用，二是有机溶剂的介电常数比水导致溶剂的极性变小。4 【吸附柱层析】是以固体吸附剂为固定相，以有机溶剂或缓冲液为流动相构成柱状的一种层析
2、方法。常用吸附剂有极性和非极性两种。前者有羟基磷灰石、硅胶、氧化铝和人造沸石等，后者有活性炭等。这种层析方法已成为科研、医学、化工及发酵等部门常规使用的一种分离手段。5 【凝胶过滤层析】使用有一定大小孔隙的凝胶作层析介质(如葡聚糖凝胶、琼脂糖凝胶、聚丙烯酰胺凝胶等)，利用凝胶颗粒对分子量和形状不同的物质进行分离的层析技术。由于各种分子的大小、形状不同，扩散到凝胶孔隙内的速度不同，因而通过层析柱的快慢不同而分离。 6 【高效疏水层析】利用适度疏水性的填料，以含盐的水溶液作为流动相，借助于疏水作用分离活性蛋白质的液相层析法称为高效疏水层析。7 【毛细管电泳】以毛细管为分离通道、高压电场为驱动力的电
3、泳分离分析法。包括毛细管自由流动电泳、毛细管区带电泳等。 在高电场强度作用下，毛细管中的待测物质可按其分子质量、电荷、淌度等因子的差异得到有效的分离。8 【等电点聚焦电泳】即电聚焦电泳法，是在一定抗对流截肢（如凝胶）中加入载体两性电解质，当直流电通过时，形成一个由阳极到阴极pH逐步上升的梯度。两性化合物在此电泳过程中，就被浓集在与其等电点相等的pH区域，从而使不同化合物能按其各自等电点得到分离。9 【离子交换层析】是以离子交换剂为固定相，液体为流动相的系统中进行的。样品中待分离的溶质离子，与固定相上所结合的离子交换，不同的溶质离子与离子交换剂上离子化的基团的亲和力和结合条件不同，洗脱液流过时，
4、样品中的离子按结合力的弱强先后洗脱。在生物化学和分子生物学领域此法常用于分离蛋白质、核酸等生物大分子。 10 【高效反相层析】利用非极性烷基固定相作为填料，以含有机改性剂（如异丙醇）的水溶液作为流动相，借助于疏水效应分离蛋白质或核酸的液相层析法。11 【亲和层析】以亲和吸附剂作为固定相，以特异性溶液为流动相，对配体（L）具有亲和力之有效成分（S）进行分离的过程。即利用分子与其配体间特殊的、可逆性的亲和结合作用而进行分离的一种层析技术。可以选用生物化学、免疫化学或其他结构上吻合等亲和作用而设计的各种层析分离方法。12 【生物传感器】利用固定化的生物敏感材料(如酶、蛋白质、DNA、抗体、抗原、生物
5、膜、微生物、细胞等)作为识别元件，与适当的理化换能器（如氧电极、光敏管、场效应管、压电晶体等等）及信号放大装置构成的分析工具或系统，将生化反应转变成可定量的物理、化学信号，从而能够进行生命物质和化学物质检测和监控的装置。13 【PCR】即聚合酶链式反应，是体外酶促合成特异DNA片段的一种方法,由高温变性、低温退火及适温延伸等几步反应组成一个周期,循环进行,使目的DNA得以迅速扩增,具有特异性强、灵敏度高、操作简便、省时等特点。14 【芯片实验室】也称微全分析系统或微流控芯片。它是采用微电子工业和半导体制造业中的一些精细工艺，在硅片、玻片和塑料等表面经过必要的物化处理后，加工出微细（微米级）结构
6、，制作成一块几平方厘米的、新兴的生物芯片，可进行化学或生物化学的实验程序。15 【层析】是以基质为固定相（柱状或薄层状），以液体或气体为流动相，使有效成分和杂志在这两个相中连续不断、反复多次地进行分配或交换、吸附作用，最终达到分离混合物的目的。常用几种溶液有平衡液、洗涤液和洗脱液。16 【固定化酶】是用适当的物理、化学方法，把粗制的或纯化的酶固定于某一空间内，使其成为既保持了本身的特性，又能在连续反应之后可以回收和重复使用的一种制品。17 【细胞凋亡】即程序性细胞死亡，是细胞通过内在的程序来决定其死亡的，常常是生理性的。18 【电渗现象】在电场的影响下，带电荷的液体对携带相反电荷的固定介质进行
7、相对运动的现象。可以改变带电离子在电泳中的移动速度甚至方向。免疫对流电泳中也利用了电渗现象。2、 选择题中的计算公式1. （P99）【分配系数Kav】Kav=Ve-Vo/Vt-VoVe：分离物体本身的洗脱体积Vo：外水体积Vt：凝胶床总体积备注：在固定相和层析柱体积已确定时，Vt和Vo都为恒定值，Ve随分离物分子质量的变化而变化（反关系）。2. （P328）【总浓度T%；交联度C%】T%=a+b/v；C%=b/a+ba：单体丙烯酰胺重量（g）b：双体（交联剂）甲撑双丙烯酰胺重量（g）v：溶液中的体积（ml）3、 各章重点第一章 生命大分子物质的制备1. 影响抽提有效成分的主要因子（选择判断）p
8、H （碱低酸高）、溶剂极性和离子强度、水解酶、温度（低温）、搅拌、氧化、金属离子抽提液与抽提物的比例（5:1）2. 破碎细胞的常用方法及目的（选择判断）机械破碎：研磨法（鼠肝、兔肝）、组织捣碎器法、超声波法、冻融法溶胀和自溶：溶胀（红血球）、自溶3. 化学处理（脂溶性溶剂或表面活性剂） 4. 生物酶降解（溶菌酶溶解细胞壁，渗透压引起细胞膜破裂）第2章 沉淀法常用的沉淀法（1） 制备蛋白质P21盐析法、有机溶剂沉淀法、蛋白质沉淀法（专一）、聚乙二醇沉淀法（专一）、选择性沉淀法、结晶沉淀法（2） 制备核酸P31DNP/RNP 复合物的解聚、多糖等杂质的消除、DNA与RNA的分离第3章 吸附层析1.
9、 吸附层析的基本原理在吸附层析法中，使用的固定相基质是颗粒状的吸附剂。在吸附剂的表面存在着许多随机分布的吸附位点，这些位点通过范德华力和静电引力与蛋白质和核酸等生物分子结合，其结合力的大小与各种生物分子的结构和吸附剂的性质有密切关系。假如吸附剂对A的结合力小于B时，则B留在柱子上部，A移至下部。如果A的分配系数小于B，则A在柱子上的移动速度大于B。因此混合物在层析柱中的分离过程，实质上是吸附、解吸附、再吸附的连续过程，或者是在固定相与流动相之间连续分配的过程。 2. 吸附柱层析法P37第4章 疏水层析疏水层析的基本原理及一般操作P59基本原理：就球形蛋白质的结构而言，其分子中的疏水性残基数是从
10、外向内逐步增加的。疏水作用弱的物质，用高浓度盐溶液洗脱时，会被先洗脱下来。当盐溶液浓度降低时，疏水作用强的物质才会随后被洗脱下来。一般操作：P60层析柱的制备（层析柱规格、固定相、装柱）加样与洗脱第5章 离子交换层析 1. 离子交换层析的基本原理及一般操作基本原理：P64离子交换剂是由载体、电荷基团（或功能基团）和反离子构成的。它在水中呈不溶解状态，能释放出反离子。在此期间，它将与溶液中的其他离子或离子化合物相互结合，结合后本身的理化性质仍保持不变。离子交换剂与溶液中的离子或离子化合物的反应主要以离子交换方式进行，或者借助离子交换剂上电荷基团对溶液中离子或离子化合物的吸附作用进行。这些过程都是
11、可逆的。离子交换层析之所以能成功把各种物质分开，其主要依据是离子交换剂对各种离子或离子化合物有不同结合力。一般操作：P83离子交换剂的处理、再生和转型；分离物质的交换；物质的洗脱与收集2. 常用离子交换剂的交换基团离子交换树脂按它的交换基团分成阳离子交换树脂和阴离子交换树脂两大类：阳离子交换树脂又分为强酸性与弱酸性，前者具有的磺酸基交换基团，适用于所有的酸性溶液,后者则是羧基、膦酸基或酚羟基,仅能用于中性至碱性溶液，但交换容量大，容易再生。阴离子交换树脂又分为强碱性与弱碱性，前者带有季胺基，适用于所有酸度的溶液，还能交换吸附弱酸；后者带有叔胺基或仲胺基，仅能用于中性至酸性溶液。3. 结合实验给
12、出多组分，分析分离结果（阴性阳性，分离前后顺序）第六章 凝胶过滤 基本原理和一般操作基本原理：P98凝胶过滤层析所用的载体是具有立体网状结构、筛孔直径较一致，且呈珠状颗粒的物质。这种物质可以全部或者部分排阻某些大分子化合物于筛孔之外，而不能排阻某些小分子化合物，但可让其在筛孔中自由地扩散、渗透。在同一凝胶过滤柱上分离分子质量不同的物质时，由于流动相的作用，这些分离物质将发生排阻和扩散效应。若将缓冲液连续倾入柱中，柱中物质的排阻和扩散效应也将不断发生，其最终结果是分子质量大的物质先从柱中流出，分子质量小的物质则后从柱中流出。一般操作:P101凝胶的选择和处理、凝胶柱的制备、加样与洗脱、凝胶柱的再
13、生及保存第7章 亲和层析 1. 基本原理亲和层析是以亲和吸附剂为固定相，以特异性溶液为流动相，对与配体具有亲和力之有效成分进行分离的过程。每对反应物之间都有一定的亲和力。在亲和层析中，特有的配体才能和匹配的生命大分子之间具有亲和力，并产生复合物。且进行反应时呈液相状态。实质上亲和层析是把具有识别能力的配体以共价键的方式固化到含有活化基团的载体上，制成亲和吸附剂，或称固相载体。而固化后的配体仍保持束缚特异物质的能力。样品中队配体有亲和力的物质可借助静电引力、范德华力以及结构互补效应等作用吸附到固定相上，而无亲和力或非特异吸附的物质则被平衡缓冲液洗涤出来。然后恰当地改变平衡缓冲液的pH，或增加离子
14、强度，或加入抑制剂等因子，即可把有效成分从固定相上解离下来。2. 亲和层析分离的三种情况（1） 亲和力较小：可以连续用大体积平衡缓冲液进行洗脱，得到迟缓的大分子物质峰。（2） 亲和力一般时：主要靠改变缓冲液的性质使有效成分与配体间的亲和力减小到足以分离的程度。（3） 亲和力较大时：可用与配体竞争的溶液或者用含蛋白质变性剂的溶液进行洗脱。 a.竞争性洗脱剂。专一性强，能洗脱出和配体特异结合的有效成分，洗脱时需要较大体积的洗脱液。 b.蛋白质变性剂。即剧烈洗脱条件，洗脱下的有效成分需要经过适当的处理，方可恢复活性。第8章 聚焦层析基本原理：P133该方法分离纯化蛋白质的依据是等电点的差异和离子交换
15、行为。蛋白质所带电荷取决于它的等电点和层析柱中的pH。当柱中的pH低于蛋白质的pI时，蛋白质带正电荷，且不与阴离子交换剂结合。而随着洗脱剂向前移动，固定相中的pH是随着时间变化的。当蛋白质移动至pH高于其pI的环境时，蛋白质变为带负电荷，并与阴离子交换剂结合。由于洗脱剂的通过，蛋白质周围的环境pH再次低于pI时，它又带正电荷，并从交换剂解吸附下来。随着洗脱液向柱底的迁移，上述过程将反复进行，于是各种蛋白质就按各自的等电点大小被洗下来，从而分离。不同蛋白质具有不同等电点，他们在被离子交换剂结合以前，移动之距离是不一样的，洗脱出来的先后次序是按等电点大小排列的。蛋白质按其等电点在pH梯度环境中进行排列的过程叫做聚焦效应。pH梯度的形成是聚焦效应的先决条件。加入样品后，它将迅速移动到与它等电点相同的pH处，从此位置开始缓慢进行吸附、解吸附，知道pHpI时被洗出；在其洗出之前，加入第二份相同样品将迁移到第一个样品缓慢移动处，然后两份样品以相同速度移动直到洗出。第9章 高效液相色谱 1. 高效液相色谱的特点高压、高效、高速、高沸点且具有分离效率高、分析速度快、检测灵敏度高和应用范围广的特点，适合高沸点、大分子、强极性和热稳定性差的化合物的分离和分析。2. 仪器构成（1） 进样系
