ecm及matrigel使用手册

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1、BD Bioscience Discovery Labware BD BiocoatTM 产品使用指南产品使用指南 BD BiocoatTM MatrigelTM 基质 BD BiocoatTM 细胞相关检测系统 BD BiocoatTM - MatrigelTM 使用指南使用指南 目目 录录 1 BD BiocoatTM MatrigelTM 基质 1.1 Matrigel 基底膜基质胶 .1 1.2 高浓度 HC Matrigel 基底膜基质胶3 1.3 人来源细胞外基质4 1.4 型人重组胶原蛋白5 1.5 高浓度层粘连蛋白/巢蛋白混合物.6 1.6 人胚胎干细胞专用的 Matrigel

2、 基质 7 2 BD BiocoatTM 细胞检测相关系统 2.1 Biocoat 肿瘤侵袭系统.8 2.2 Biocoat 血管生成系统：内皮细胞侵袭.10 2.3 Biocoat 血管生成系统：内皮细胞迁移.12 2.4 Biocoat 血管生成系统：内皮血管形成.14 2.5 Biocoat HTS Caco-2 检测系统15 附录：细胞培养系统快速使用指南.17 BiocoatTM MatrigelTM常见问题17 BD BiocoatTM - MatrigelTM 使用指南使用指南 BD BiocoatTM - MatrigelTM 使用指南使用指南 1 BD BiocoatTM M

3、atrigelTM 基质基质 1.1 Matrigel基底膜基质胶基底膜基质胶 BD 产品货号：产品货号：354230 354234 356230 356231 356234 356235 356237 储存和运输：储存和运输：-20 度储存，干冰运输。 操作指南操作指南 BD 采用专利技术，从富含胞外基质蛋白的 EHS 小鼠肿瘤中分离出 BD Matrigel 基底膜基 质，其主要成分由层粘连蛋白，型胶原，巢蛋白，硫酸肝素糖蛋白等组成，还包含生长因子 和基质金属蛋白酶等。BD Matrigel 基底膜基质在室温条件下，聚合形成具有生物学活性的三维 基质，模拟体内细胞基底膜的结构、组成、物理特

4、性和功能，有利于体外细胞的培养和分化， 以及对细胞形态、生化功能、迁移、侵染和基因表达的研究。 BD Matrigel 基底膜基质形成的三维培养基质，可促进上皮细胞、肝细胞、Sertoli 细胞、黑 色素瘤细胞、血管内皮细胞、甲状腺细胞及毛囊细胞等的贴壁与分化。同时，Matrigel 还能影 响乳腺上皮细胞的蛋白表达，支持外周神经的新生和牛输卵管上皮细胞的分化。高浓度的 Matrigel 适用于研究体内血管生成和肿瘤细胞迁移及肿瘤模型的建立等。 产品特性产品特性 Matrigel 基质会有色差变化 （淡黄色到深红色） ， 是由于酚红和碳酸氢盐与 CO2作用引起的， 但是与 5CO2平衡后色差即

5、会减少。冻融后，轻轻摇晃试剂瓶使 Matrigel 分散均匀。所有操 作均需在无菌环境下进行，试剂瓶瓶盖可用 70乙醇擦拭，并自然干燥。应使用预冷的移液器 以保证 Matrigel 呈匀浆状。 细胞可在 0.5mm 厚度的 Matrigel 基质层表面生长，也可在 1mm 厚度的 Matrigel 三维基质 内生长。过度稀释的 Matrigel 会形成非胶质的蛋白层，可以用于细胞贴壁，但不能用于细胞的 分化研究。 注意：注意：可将冻融后的 Matrigel 分装在多个小管，所有分装均需用预冷的冻存管，迅速冷冻并保 存，避免多次冻融。 Matrigel 在 22-35温度环境下快速成胶，因此溶解

6、时在 4冰上过夜冻融（4 度时会随着 温度的上升部分成胶） 。所有用品在使用前需置于冰浴，必须使用预冷的移液管、吸头及小管操 作 Matrigel。成胶后的 Matrigel 可以在 42448 小时后重新呈液态。 推荐包被与成胶方法推荐包被与成胶方法 注意：注意：为了保证 Matrigel 基质膜的成胶性能与稳定性，稀释浓度不应低于 1：3，可用无血清培 养基稀释，Matrigel 成胶后立即使用。 薄胶成胶方法：薄胶成胶方法： 1、 冻融后，用预冷的移液枪头混匀 Matrigel 基质成匀浆状。 2、 将需要使用的培养板置于冰上，加入浓度为 50L/cm2生长面积的 Matrigel 基质

7、。 3、 在 37放置 30 分钟，即可使用。 厚胶成胶方法：厚胶成胶方法： 1、 冻融后，用预冷的移液枪头混匀 Matrigel 基质成匀浆状。 2、 将需要使用的培养板置于冰浴，将培养的细胞与 Matrigel 基质混合，用移液枪头使其悬浮 于基质中。加入浓度为 150200L/cm2生长面积的 Matrigel 基质。 3、 在 37放置 30 分钟，可成胶。可以加入细胞培养的基质，也可使细胞直接生长在胶表面。 薄层包被方法：薄层包被方法： 1 BD BiocoatTM - MatrigelTM 使用指南使用指南 1、 冻融后，用预冷的移液枪头混匀 Matrigel 基质成匀浆状。 2、

8、 根据使用需要，采用无血清培养基稀释 Matrigel 基质。根据实验需要确定最佳包被浓度。 3、 将稀释的 Matrigel 基质包被于所需的培养器皿中，包被量至少覆盖整个器皿的生长表面。 室温下孵育 1 小时。 4、 去除未结合的 Matrigel，用无血清培养基轻轻地冲洗。 用 BD 细胞回收剂（354253）或离散酶（354235）可降解 Matrigel 基质，冰浴 7 小时后回收得 到细胞。 2 BD BiocoatTM - MatrigelTM 使用指南使用指南 1.2 高浓度高浓度HC Matrigel基底膜基质胶基底膜基质胶 BD 产品货号：产品货号：354248 35426

9、2 储存和运输：储存和运输：-20 度储存，干冰运输。 产品特性产品特性 Matrigel 基质会有色差变化 （淡黄色到深红色） ， 是由于酚红和碳酸氢盐与 CO2作用引起的， 但是与 5CO2平衡后色差即会减少。冻融后，轻轻摇晃试剂瓶使 Matrigel 分散均匀。所有操 作均需在无菌环境下进行，试剂瓶瓶盖可用 70乙醇擦拭，并自然干燥。应使用预冷的移液器 以保证 Matrigel 呈匀浆状。 细胞可在 0.5mm 厚度的 Matrigel 基质层表面生长，也可在 1mm 厚度的 Matrigel 三维基质 内生长。过度稀释的 Matrigel 会形成非胶质的蛋白层，可以用于细胞贴壁，但不能

10、用于细胞的 分化研究。 注意：注意：可将冻融后的 Matrigel 分装在多个小管，所有分装均需用预冷的冻存管，迅速冷冻并保 存，避免多次冻融。 Matrigel 在 22-35温度环境下快速成胶，因此溶解时在 4冰上过夜冻融（4 度时会随着 温度的上升部分成胶） 。所有用品在使用前需置于冰浴，必须使用预冷的移液管、吸头及小管操 作 Matrigel。成胶后的 Matrigel 可以在 42448 小时后重新呈液态。 注射步骤：注射步骤： 1、 注射前，必须保证 Matrigel 和细胞悬浮液在不冷冻的情况下，尽可能地保持低温，同时保 证每一步都无菌操作。 2、 对于每只注射小鼠，冰上混合 0

11、.5 mL 细胞（2105或更多细胞）和 Matrigel 混合液。 3、 细胞注射体积需尽可能小。通常，用含有 2106/mL 细胞的 250L 预冷培养基，混合 250L 冰浴的 Matrigel。 4、 小鼠皮下注射，19G 针用于组织样品，23G 针用于培养的细胞。注射动作必须快速，以避 免 Matrigel 凝固。 5、 抽出注射器时旋转以防止泄漏。针头需要经常更换以避免堵塞。 用 BD 细胞回收剂（354253）或离散酶（354235）可降解 Matrigel 基质，冰浴 7 小时后回收得 到细胞。 3 BD BiocoatTM - MatrigelTM 使用指南使用指南 1.3

12、人来源细胞外基质人来源细胞外基质 BD 产品货号：产品货号：354237 储存和运输：储存和运输：-20 度储存，干冰运输。 产品特性产品特性 人源细胞外基质是来源于人体胚胎、经过层析纯化而得的细胞外基质提取物，由层粘连蛋 白，IV 型胶原，硫酸乙酰肝素蛋白多糖（HSPG）等成分组成。人细胞外基质对贴壁依赖性上 皮细胞特别是人源性细胞，有促进其贴壁、延展、代谢和分化的作用。 配方：配方：0.02M 磷酸钠溶液，pH 值 7.4 包被方法：包被方法： 1 用无血清培养基吸收细胞外基质到一定的浓度。最终浓度应足以满足覆盖培养器皿表面的 量。例如：最终包被浓度为 5.0 g/cm2，应将基质稀释到

13、50 g /mL，在 35 mm 的培养皿中 加入 1mL 基质，在 60mm 培养皿中加入 3 mL 基质。 2 根据培养皿面积加入合适的已稀释基质。 3 室温孵育 2 小时。 4 吸走多余的基质。 5 仔细清洗培养器皿，避免刮擦底部表面。 6 包被后的培养器皿，应储存于 2-8的潮湿环境中，或在无菌环境中自然干燥。 4 BD BiocoatTM - MatrigelTM 使用指南使用指南 1.4 型人重组胶原蛋白型人重组胶原蛋白 BD 产品货号：产品货号：354255 储存和运输：储存和运输：-20 度储存，干冰运输。 操作指南操作指南 型胶原在皮肤、心血管系统和成年人的正常生理功能中发挥

14、重要作用。型胶原蛋白在 正常人心血管纤维形成中起重要作用，还可用作促进细胞贴壁和调节细胞行为。 使用注意事项：使用注意事项： 型人重组胶原蛋白，可用于体外实验的薄胶包被，但也能优化用作胶。如果一次不能使用完， 可分装后储存于 2-8。 推荐包被与成胶方法推荐包被与成胶方法 薄胶包被：薄胶包被： 1、 选择合适的包被浓度。推荐包被浓度为：0.2-2 g/cm2，视细胞种类决定。加入的包被体积 必须足以覆盖细胞生长表面。如有必要，可将胶原蛋白用 10 mM 醋酸稀释。 2、 当生长表面完全覆盖后，室温孵育 2 小时。倾斜培养皿至 45 度，使多余的胶原蛋白都聚集 在培养皿的最低点。 3、 用移液器

15、去除多余的胶原蛋白。 4、 在层流超净台上空气自然干燥或用灭菌的柔和气流干燥。 5、 器皿包被完成，可备用。 成胶方法：成胶方法： 1、 加入 9 份的人重组胶原蛋白和 1 份的 10 倍中性缓冲液或无菌组织培养基。 2、 将混合液加入需要的培养器皿中。 3、 室温孵育 60 分钟。 4、 细胞可接种于胶的表面。如需将胶从培养皿中转移或用于更多操作，在成胶前混合细胞和 胶原蛋白。 5 BD BiocoatTM - MatrigelTM 使用指南使用指南 1.5 高浓度层粘连蛋白高浓度层粘连蛋白/巢蛋白混合物巢蛋白混合物 BD 产品货号：产品货号：354259 储存和运输：储存和运输：-20 度

16、储存，干冰运输。 操作指南操作指南 层粘连蛋白/巢蛋白混合物是 EHS 小鼠肿瘤基质膜的主要成分。纯化后，成等摩尔浓度分 布。 二价阳离子有利于混合物的形成。 在 2 mg/mL 浓度时， 层粘连蛋白/巢蛋白可以形成三维胶， 可用于细胞生长和分化的研究。三维胶更接近体内微环境。细胞的分化受到与单一或混合细胞 外基质蛋白之间的相互作用的影响，因此在层粘连蛋白/巢蛋白混合物上培养细胞，可以用以观 察并揭示细胞分化和功能性的特性机理。混合蛋白的成胶过程对温度敏感。此外，高浓度的层 粘连蛋白/巢蛋白（2-6 mg/mL）也用于人下颌腺泡细胞分化和内皮细胞的血管形成研究。 注意事项：注意事项： 1、 所有操作的工作温度不能高于 4， 蛋白需冰上操作保存， 用冰块冷却的溶液或细胞悬浮液 稀释。 2、 由于混合蛋白溶液粘性较高，必须使用预冷的注射器型移液管，如 Gilson M 系列；避免使 用气压式移液管或吸头。 推荐包被方法推荐包