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1、基于E6、E7 mRNA 的新一代宫 颈癌筛查技术 宫颈癌检测的里程碑 2003 ThinPrep 影像系统 1996 ThinPrep液 基细胞学检测 1999 Hybrid Capture2 HPV检测 2009 CervistaHPV 及 16/18 分型试剂 1941 宫颈Pap涂片 1990s2000s 1999 SurePath细 胞学检测 2010s 2011/2012 APTIMAHPV 及16 18/45分型试剂 2011 cobasHPV 12+2检测 1970s Hausen教授研究发现与 宫颈癌与HPV感染相关 2006 ThinPrep 可用于腺细胞 DNA DNA
2、DNA mRNA 宫颈癌筛查技术的发展 宫颈癌筛查技术发展趋势 高危型 HPV检测 细胞学 检测 自动化 自动化 检测 HPV DNA 第1代试剂 检测 HPV E6, E7mRNA 第2代试剂 巴氏涂片 Pap Smear 第1代试剂 液基细胞学 LBC 第2代试剂 HPV的基因组结构 E1、E2、E4和 E5负责病毒复制 E6、E7为两种致癌 蛋白编码，它们是高 危型HPV导致宫颈癌 的主要原因 L1、L2为两种病毒外 壳蛋白编码，在预防 HPV的疫苗中使用了 L1，大部分HPV检测 方法检测L1区 逆转录区域包括 控制病毒基因组 复制的基因序列 HPV 病毒感染的两个阶段 HPV DNA
3、和人类DNA发生整合 宫颈细胞DNA 游离HPV DNA 初始HPV感染持续性HPV感染 E6、E7 mRNA E6、E7 癌蛋白 E6/E7 mRNA不表达或低表达 不导致细胞高级别病变 可被清除，一过性感染 高水平的E6/E7 mRNA表达 导致细胞高级别病变 发展为持续性感染 Doorbar. Clinical Science 2006. 110(5):525-41 E6、E7 mRNA 在宫颈病变的不同阶段 正常上皮细胞CIN1CIN2CIN3浸润癌 正常 HPV 感染 癌前 病变 宫颈癌 感染 清除 进展 退化 进展 E6,E7 mRNA E6,E7 mRNA E6,E7 mRNA
4、E6,E7 mRNA Kate Cuschieri and Nicolas Wentzensen, Cancer Epidemiol Biomarkers Prev 2008;17:2536-2545. HPV DNA检测的局限性 90%的HPV感染是一过性的，3年内会被免疫清除 HPV检测，不是为了检测感染，而是为了发现宫颈癌高级别病变 (CIN 2+) HPV DNA是HPV的结构基因，DNA阳性，只说明HPV感染； E6/E7 mRNA是HPV致癌基因活跃状态的指标 如果没有E6/E7mRNA的大量转录，即使有高危HPV感染，也是不会发生宫颈癌的。 “It is therefore lo
5、gical to hypothesize that detection of E6/E7 mRNA may identify more clinically significant infection than a DNA approach where a structural gene is targeted” 因此，从逻辑上我们可以推测，检测E6/E7 mRNA 相比 DNA的方法，能更加精确 发现具有临床重要性的感染。 Kate Cuschieri and Nicolas Wentzensen, Cancer Epidemiol Biomarkers Prev 2008;17:2536-
6、2545. HPV 感染的困惑 患者：我的HPV DNA检测结果是阳性，我会发生宫 颈癌吗？我为什么会感染HPV病毒？ 医生：我怎么和患者解释HPV DNA阳性结果？ 患者心理压力 患者身体伤害 个人和社会医疗成本 患者家庭和谐 医患关系 新一代宫颈癌筛查技术 E6/E7 mRNA 两种检测试剂盒： Aptima HPV （14种高危亚型）和 Aptima HPV 16,18/45 分型检测 检测HPV 致癌基因E6、E7 的mRNA 样本类型：ThinPrep 细胞保存液 自动化检测平台：Panther 与第一代HPV DNA检测试剂相比： 相同的临床灵敏度和阴性预测值，更好的临床特异性和
7、阳性预测值 减少对一过性HPV 感染的检出，减少不必要的阴道镜 转诊，减少病人不必要的心理压力 关注“病变”，而非“感染” FDA批准的临床指引 Aptima HPV: 21岁 以上, 细胞学 ASCUS 分流 30岁 以上, 一线和细胞学联合检测 Aptima HPV 16,18/45 Genotype: 21岁 以上, 细胞学ASCUS人群中，对Aptima HPV阳性结果 的分型检测 30岁以上，一线联合筛查中Aptima HPV阳性结果的分型 ACOG 关于 E6、E7 mRNA检测的说明 E6/E7 mRNA的检测性能是可接受的，委员会将在指 南中使用更加通用的语言来表述HPV检测，
8、而不特定 指HPV DNA。 （E6/E7 mRNA 检测应被看作是HPV检测的一种， 在指南中与其他HPV具有相同的临床路径） 美国妇产科医师协会（ACOG）指出： HPV 检测的设计策略 原癌基因原癌基因 1 Hybrid Capture 2 High-Risk HPV DNA Test package insert #L00665 Rev. 2 2007 2. cobas HPV Test US Package Insert #05641268001-0N Rev 1.0 2013 3. Abbott RealTime High Risk HPV Package Insert #2N09
9、49-2028/R3 B2N090, Mar. 2010 4. APTIMA HPV Assay package insert #502170 Rev A 2011 HPV DNA L2L1LCRE6E7E1E2E5E4Hybrid Capture 2 1 Roche HPV 引物/探针 L2L1LCRE6E7E1E2E5E4 cobas HPV2 Abbott RealTime High Risk HPV3 L2L1LCRE6E7E1E2E5E4 APTIMA HPV 探针 APTIMA HPV4 HPV DNA HPV mRNA hc2 探针 检测L1 区域的局限性 假阴性 致癌 人类基因
10、组L2L1LCRE6E7E1E2 HPV DNA全基因组整合 人类基因组 LCRE6E1E2 部分整合，L1基因丢失 E7人类基因组人类基因组 在高级别病变中（如宫颈癌），HPV病毒与人类DNA发生整合： 以线性结构进行整合 整合过程部分基因区段会发生丢失 致癌 癌变风险1 1 2 基于L1区设计的HPV，会导致宫颈癌的漏诊是全球公认的 Morris. Clin Chem Lab Med 2005; 43(11):1171-1177 检测L1 区域的局限性 假阴性 临床研究临床研究研究范围研究范围/ 区域区域HPV Test 宫劲癌例宫劲癌例 数数 (n) HPV DNA检出检出假阴性率假阴性
11、率(%) Guerrero, J Clin Micro 1992Columbia, SpainPCR L1 30220831.1 Williamson, J Med Virol 1994South AfricaPCR L1 685519 Karlsen, Eur J Cancer 1995NorwayPCR L1 14613011 Burger, J Nat Can Inst 1996US (California)PCR L128724514.6 Baay, J Clin Micro 1996NetherlandsPCR L1 16211827.2 Torroella-Kouri, Gynec
12、ol Oncol 1998MexicoPCR L1696013 Schwartz, J Clin Oncol 2001US (Washington State)PCR L139934214.3 Shellekens, Gyn Onc 2004IndonesiaPCR L1 74714.1 Hoyer, Int J Cancer 2005GermanyPCR L1 9633.3 Sowjanya, BMC Int Dis 2005IndiaPCR L1413612.2 Herrero, J Inf Dis 2005Guanacaste Costa RicoPCR L135342.9 Steven
13、s, Int J Gyn Can 2006AustraliaPCR L1 19116613.1 Peedicayil, Int J Gyn Can 2006IndiaPCR L1 1191135 Castellsaque, J Nat Can Inst 2006WorldwidePCR L1 1671566.6 Keita, Br J Cancer 2009GuineaPCR L1 77709.1 Wheeler, J Nat Can Inst 2009US (New Mexico SEER)PCR L12,0211,9135.3 Illades-Aguiar, Cancer Det Prev
14、 2009MexicoPCR L1 1331330 Roa, Int J Gyn Obstet 2009ChilePCR L1 3122945.8 Raza, Br J Cancer 2010PakistanPCR L1 91838.8 回顾全球多个临床实验，针对L1 的HPV DNA 试剂检测宫颈癌： HPV DNA： 商用或实验室自制科研检测 检测L1 区域的局限性 假阴性 临床研究研究范围 / 区域HPV Test 宫劲癌例 数 (n) HPV DNA检出假阴性率 (%) Okolo, Inf Agents Cancer 2010NigeriaPCR L168671.5 de Sanjo
15、se, Lancet Oncology 201038 countries world-widePCR L110,5758,97715.1 Odida, Inf Agts Cancer 2010UgandaPCR L1 1711549.9 Mariani, BMC Cancer 2010ItalyPCR L1 1341219.7 Dreier, Virology 2011AustriaPCR L1 363211.1 Tornesello, Gyn Onc 2011ItalyPCR L1 17114018.1 Basu, J Clin Micro 2011IndiaPCR L1 19216613.
16、5 Waldstom, Cytopathology 2011DenmarkPCR L1 110 Biernat-Sudolska, Adv Med Sci 2011PolandPCR L1 49458 Coutlee, J Med Virol 2011CanadaPCR L125222311.5 Castle, Can Ep Biom Prev 2011USPCR L197943.1 Castle, Lancet Oncol 2011ATHENA (Roche US Trial)PCR L1201810 TotalL1 DNA16,46914,27113.3 HPV DNA： 商用或实验室自制科研检测 回顾全球多个临床实验，针对L1 的HPV DNA 试剂检测宫颈癌： 检测HPV DNA 的 L1区，有10%的宫颈癌会发生漏检 检测L1 区域的局限性 假阴性 If the viral HPV is completely integrated then an
