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1、不同地理株旋毛虫感染小鼠 IL-2 水平变化及肌幼虫分布研究 *1赵蕾，陈晓宁，王丽娜，赵长祺，杜娈英摘要 ：目的 观察河南株、云南株和黑龙江株 3 株旋毛虫感染小鼠后 IL-2 水平变化及肌幼虫分布的差异。方法 取昆明雄性小白鼠 120 只，体重 1822 g，随机分成河南株、云南株、黑龙江株感染组(每鼠分别感染相应旋毛虫幼虫 200 条)和1 个正常对照组，每组 30 只。ELISA 法检测小鼠感染旋毛虫后第1、2、3、4、5、6w 血清 IL-2 含量；6w 后，肌肉压片镜检，观察不同组旋毛虫囊包幼虫在肌肉内的分布情况，比较不同组同一部位肌幼虫分布的区别。结果 河南株、云南株和黑龙江株
2、3 株旋毛虫感染小鼠后 IL-2 分泌量增加，由第1w 持续到第 5w，其中感染后第 1w 达到峰值，以后逐渐下降至正常水平，至第 6wIL-2 的分泌量略低于正常水平；另外，不同地理株旋毛虫感染小鼠后均可以导致宿主肌幼虫数量的增加，但是不同虫株感染后肌幼虫数量不同。结论 不同地理株旋毛虫感染小鼠后，IL-2 变化趋势相同，同一时期河南株 IL-2 分泌量最高，云南株略低，黑龙江株最低；小鼠同一部位肌幼虫分布有所差异，河南株感染度最高，云南株次之，黑龙江株最轻。关键词：旋毛虫；IL-2；肌幼虫Level of IL-2 and the distribution of muscle larva
3、in mice infected with different geographical isolates of Trichinella(Department of Pathogen Biology,ChengDe Medical College ,Hebei Province,067000,China )ABSTRACT: To investigate the level of IL-2 and the distribution of muscle larva in mice infected with Trichinella of Henan isolates，Yunnan isolate
4、s and Heilongjiang isolates, 120 Kunming male mice (weight from 18 to 22g) were grouped randomly into Henan isolates group,Yunnan isolates group and Heilongjiang isolates group (infected with 200 T.spiralis larvae respectively) and a control group, with 30 mice in each group. ELISA was used to test
5、the level of IL-2 in serum 6 weeks after the mice infected with Trichinella . The distribution of encapsulated muscle larva of each 1河北省教育厅自然科学基金重大项目(No.034504)通讯作者：陈晓宁，Email：作者单位：承德医学院病原生物学教研室 group were observed . As mean while, the distribution of muscle larva in the same position of different gr
6、oup were compared. The level of IL-2 in mice infected with Trichinella of Henan isolates，Yunnan isolates and Heilongjiang isolates increased after 5 weeks of infection. Then it gradually returned to the normal level and was lower than the normal level at the sixth week. Different infective isolates
7、could lead to an increase in the distribution of muscle larva，but the number of muscle larva in mice infected by different isolates was different. The level of IL-2 in the mice infected with Trichinella of different isolates was same. To compared the level of IL-2 of the three isolates in the same p
8、eriod, the highest one was Henan isolates, the lowest one was Heilongjiang isolates, Yunan was the middle one. The number of muscle larva in the same muscle of different isolates infected mice was different. Among these groups, the highest extent of inflection was Henan isolates ,the middle one is Y
9、unan isolates, the lowest one is Heilongjiang isolates. KEY WORDS: Trichinella；IL-2; muscle larva旋 毛 虫 病 是 一 种 呈 世 界 性 分 布 的 人 兽 共 患 病 ， 可 造 成 150 多 种 动 物 感 染 ，引 起 食 源 性 寄 生 虫 病 ， 严 重 危 害 人 类 生 命 健 康 及 畜 牧 业 发 展 。 尽 早 检 测 发 现肉 类 中 的 旋 毛 虫 ， 可 以 有 效 地 切 断 旋 毛 虫 病 的 传 播 途 径 ， 进 而 达 到 遏 制 旋 毛虫 病 蔓 延 扩
10、散 的 效 果 。目前，人工消化法被认为是肉中旋毛虫检疫的 “金标准” 1 ，但此法检出率仅达 70%2。研究表明，细胞因子在旋毛虫病的免疫应答和免疫逃避中发挥重要作用，其中 IL-2 受到广泛瞩目。 IL-2 可以从细胞、体液免疫两方面增强宿主的免疫反应，从而达到抑制虫体增殖，降低感染力的目的 3-5。对旋毛虫感染小鼠后血清 IL-2 变化的研究，有助于深入了解感染宿主的免疫应答水平及免疫调控状态，对旋毛虫病的临床诊治和免疫预防具有一定的指导意义。为此，本研究对感染不同地理株旋毛虫小鼠的血清 IL-2 进行了动态观察并对宿主肌肉内旋毛虫幼虫进行检测，以期找到不同种株间的差异性。1 材料与方法
11、1.1 旋毛虫地理株 实验用旋毛虫株（黑龙江株，河南株，云南株）均为猪源型，由承德医学院病原生物学教研室自行用小鼠保种传代。1.2 实验动物 昆明种纯系雄性小白鼠120只，体重1822 g，由首都医科大学实验动物中心提供（动物许可证号：2005-2006），随机分成3个实验组和1个对照组，每组30只。1.3 小鼠血清 IL-2 含量的测定 取河南株、云南株和黑龙江株 3 株旋毛虫保虫小鼠各 1 只，处死后分离出全身肌肉，并将其捣碎后用改良贝氏法收集囊包幼虫。将收集到的囊包幼虫分别经口感染小鼠，200 条/只。小鼠感染旋毛虫后第1、2、3、4、5、6 w 于眼眶静脉取血 0.30.5mL，肝素抗
12、凝血 ,以 2000r/min 离心 15min 分离血清，于-70 度冰箱中保存备用。同时取正常对照组小鼠血，分离血清。采用 ELISA 法检测小鼠 IL-2 的水平，用医学实验数据处理智能系统自动换算 IL-2 含量。1.4 组织内肌幼虫分离计数 将造模 6w 后的三组感染组小鼠处死，剖杀，剥皮后去除内脏和脂肪，分别取舌肌、咬肌、肋间肌、膈肌、胸肌、腹肌、前腿肌、后腿肌等不同部位肌肉各 50mg，肌肉压片镜检，观察不同组囊包幼虫在肌肉内的分布情况及幼虫含量，比较同组不同部位及不同组同一部位肌幼虫分布的区别。1.5 统计分析 采用 SPSS 11.5 统计软件进行分析，各时间点组间血清 IL
13、-2、不同部位旋毛虫肌幼虫、不同地理株旋毛虫肌幼虫分布的数据满足正态分布，其比较采用单因素方差分析。P0.05，存在统计学差异。2 结果2.1 感染结果 实验组旋毛虫感染模型全部感染成功。2.2 IL- 2分泌量 3组实验小鼠感染后 , 血清中IL- 2 分泌量在第1-5w明显高于对照组, 有显著性差异 ( P 0. 05) ,在第6w IL-2的分泌量低于对照组 ( P 0. 05)，IL- 2 的分泌量随感染时间的延长而呈下降趋势,见图 1。图1 不同地理株旋毛虫感染小鼠后血清IL-2的比较Fig. 1 The level of IL-2 in mice infected with dif
14、ferent isolates of the Trichinella2.3 河南株、云南株、黑龙江株三种不同旋毛虫感染小鼠膈肌、咬肌、舌肌、腰肌、腹肌、前肢及后肢肌肉幼虫的数量差异有统计学意义（P 0.01） 。进一步的 q 检验两两比较提示：河南、云南、黑龙江株三种不同旋毛虫感染小鼠膈肌、咬肌、舌肌、腰肌、腹肌、前肢及后肢肌肉虫荷的数量两两比较同样具有统计学差异。2.4 分别分析同一旋毛虫株感染小鼠后不同部位肌幼虫分布显示：河南株、云南株以及黑龙江株旋毛虫感染小鼠后不同部位肌幼虫数量不相同，其差异具有统计学意义（P0.01） 。见图 2.图 2 不同地理株旋毛虫感染小鼠后肌幼虫分布 Fig.
15、 2 The distribution of muscle larva in mice infected with different isolates of the Trichinella3 讨论 对于不同地域或宿主分离的旋毛虫株所存在的生物特性及基因差异，国内外学者对此均有相关研究。Klassen等人的研究 6和Zarlenga等人的研究 7用特异性探针杂交技术证明了不同宿主体内旋毛虫具有差异。Rosa等人的研究 8和Snyder等人的研究 9则使用同工酶分析了来自不同宿主和地理分布区的旋毛虫株，结果表明不同地域及宿主的虫株同工酶酶谱不同，实验说明地域在基因的多态性方面起着一定的影响作用。
16、通过本实验的数据显示，不同地理株感染小鼠后均可以导致宿主肌幼虫数和血清IL-2的增加，但是不同地理株之间有所差别。三种旋毛虫株感染小鼠后均出现IL-2 的分泌增加，由第1w 持续到第5w ，逐渐下降至正常水平，至第6w IL-2的分泌略低于正常水平。河南株、云南株和黑龙江株旋毛虫感染小鼠后第6w的血清IL-2分别比正常对照组低0.17、0.72、0.36 pg/ml。其相关机制可能涉及：旋毛虫感染小鼠后前5w 内，血清IL-2 的增加可能与相关物质诱导IL-2生成有关，并与CD4 +对抗原刺激的应答能力增强，活化的Th1细胞 IL-2的分泌量增加所致。随着时间进展，IL-2可以刺激CD8 +Ts细胞大量增殖， 使CD4 +/CD8+细胞比值下降，从而导致感染旋毛虫小鼠免疫功能的抑制，即形成免疫逃避。在第6w的时候， IL-2 下降至低于正常组分泌水平，这与此时旋毛虫已形成完整囊包，抗原分泌量减少有关;与此同时，Th2 产生的IL-5和IL-10细
