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1、1,全自动生化分析仪的 临床应用,2,内容,了解生化分析仪的分类 常用的分析方法 生化仪的参数设置 生化仪的校准 质量控制 使用常见问题 维护与保养,3,生化分析仪的分类,按反映装置的结构 连续流动式（空气分段系统与非分段系统 离心式 分离式：目前最广泛的应用于临床 干化学法干片式 按自动化程度分全自动与半自动 按检测项目可分单通道与多通道 按仪器的复杂程度可分小型、中型、大型,4,连续流动式,【结构】 样品盘、比例表、混合器、透析器 【工作原理】 通过电脑来控制比例泵，将样本和实际注入到连续的管道系统中，在一定温度下完成混合、去干扰、保温、比色测定，经信号放大、运算处理最后显示结果并打印 【
2、仪器特点】 在检测过程中，样品与样品之间需要用空气进行隔离，或是用空白试剂缓冲液/惰性液来隔离 空气分段系统：防止交叉污染 非空气分段系统试剂分段系统，每一次进样必须在前一样品检测完毕才能开始，不能连续一次进样。,5,离心式,【结构】 加样：样品盘、吸样臂、试剂臂和电子控制部分 分析单元：离心转盘、温控器、光学系统、信息处理与显示系统。 【工作原理】 先将样品和试剂分别置于转盘相应的凹槽内，在离心力的作用下，样品和试剂被甩到转盘外的比色槽内并相互混合繁盛反应，一定时间后进行比色。 【仪器特点】 反应器就是转盘，整个分析过程的每一步骤几乎同时完成，分析速度快，适合同一项目的批量检测。,6,分立式
3、,【结构】 样品处理系统：模仿人工操作，识别样品与试剂加入到反应器中，有试剂盘，样品架、加液器、和搅拌器等 光学系统：光源、分光、比色、和信号拣流 温控系统：保持反应体系的温度恒定，有水浴、空气浴和液相流动恒温系统 清洗：吸、注、擦：吸走废液-注入洗涤液或水、擦干杯内壁 计算机处理系统：识别样品与试剂并完成样品与试剂的加入与混合，最终处理计算数据并打印。 【工作原理】 以人工操作的工作模式，用机械臂代替人工手臂的工作，按设定的程序完成各项操作 【特点】 样品与试剂有固有的试剂或样本反映盘，个项目在各自的反应杯中独立进行。,7,分离式模式图,8,干片式,【仪器类型】 反射光度法：对试纸条上反应区
4、通过反射光光度法进行判别。 胶片涂层分析：把试剂片置于多层涂膜的反应片上进行检测，可检测一个到几十个项目项目 袋式分析仪：将时间与样本同时置于反应袋中反映完毕将袋中物做成比色物质来检测 【特点】 液相反应在固相载体上进进行，化学、光学、酶学、计算、于一身，操作简单检测速度快，适于急诊或床前检测。,9,性能评价,【自动化程度：根据实验室的规模来制定 【分析效率】根据工作量及样本的多少来确定选择仪器的反应速度。 【应用范围】根据检测项目来选择 【准确度与精密度】越高越好 【试剂的开放程度】开放程度越高灵活性越大，但是系统的稳定性稍差,10,常用的分析方法,终点法 连续监测法 比浊法 均相酶免疫分析
5、,11,终点法,单点检测：使用一种或是两种试剂，检测反应到达终点时的吸光度如-ALB、TP等 两点法：又称固定时间法，使用双试剂或単试剂，如苦味酸测肌酐 双波长的作用：消除背景干扰,12,连续监测法,1.一步法：酶的检测底物就是所检测的物质 Ea Ei 2.酶偶联反应：s1+s2p1+p2p3+p4 Ea：辅酶 Ei：指示酶,13,比浊法,检测物质对光的散射或透射强度，测定的是浊度而非比色，可用于终点分析，也可用于动态分析。 化学比浊：血清中K、Na离子的检测 免疫比浊：透射比浊/散射比浊，透射比浊采用终点法，自动生化仪最常用，一般用作特定蛋白的检测，如：载脂蛋白、急时相蛋白、药物，而散射比浊
6、用的仪器是特制的。,14,全自动生化仪参数,样品与试剂量的设置 检测方法 波长 温度 分析时间 校正方法,15,样品与试剂的量与方法,【样品与试剂量】 以手工法按比例缩减 根据仪器的特性确定加样量范围，最小反应体积等情况自行设计 考虑到检测的灵敏度与线性范围，试剂与样本量需要的多少是衡量一台仪器品质的重要指标 【检测方法】 根据所做的项目及仪器的方法来设定终点法、动力学法（上升或下降）,16,波长,吸收曲线的低谷是空白波长，吸光度大而且平的波长为分析波长；若使用光栅或单色光器，光路采用后分光，波长更准确。 单波长：测定体系中含有一种组分或待测组分的吸收波长与其他共存的物质的吸收波长无重叠，有几
7、个吸收峰的物质一般选择最大吸收峰或是吸收峰处吸光度随波长变化较小的的波长 双波长：干扰物的光吸收会出现光散射或是非特异性光吸收 主波长：待测物特定的吸收波长 副波长：干扰物在主波长的吸收与副波长的吸光率越接近越好如：己糖激酶法检测GLU，为了消除Hb的干扰选择340/380nm,17,温度与分析时间,【分析温度】 一般设定在体温（370C) 【分析时间】 1终点法：一般是选择开始的时间（即选择实际与样本的混合瞬间，这样可以除去实际与样本的空白）结束时间一般以反应达终点时的时间来计算 A=A2-A1 A2：终末吸光度 A1：初始吸光度 2.动态分析时间：选定读数的起始点。也就是说延迟时间按后开始
8、，结束时间一定要在线性反应期内。计算按下公式： A/min=(A末-A始)/(T末-T始),18,分析仪的校准,仪器校准：波长、温度、加样量、空白吸光度（一般由厂家来完成） 项目校准：是常规工作进行的，也就是我们所说的调标。 基质效应：样本校准物处于相同的条件下进行 校准物的选择：应该溯源的国际或国家的参考方法 附：不允许用定值质控品代替校准物质。,19,分析仪的校准,【校准频率】 系统校准：若是封闭系统则校准周期可以长一些，若是开放系统校准频率应该高一点。 更换试剂或是批号不同时应该校准后再用。 室内质量控制出现异常波动或 偏移好时，此项目应该重新校正。 仪器更换部件或是大修过以后所有项目均
9、应该矫正一次。,20,分析仪的校准,【校准方法】 校准物的选择： 1.两点法校准：多数非酶类的检测使用两点校准，其曲线应该是过原点的一条直线。 2.多点校准:应用一定梯度的校准液进行校准，多数是免疫透射比浊检测使用，由于其线性较差，所以选择多点校准。 3.因数校准：酶类检测应用较多，近年来推出的酶类标准品也可以采用两点校准。,21,质量控制,准备：人员培训、建立sop文件、做好仪器的检定与校准。 选择质控品：一般选择两个水平的含量，其中之一要有一个正常水平的，另一个可以是临床水平或是超临床水平的。 测定频率质控规则的选择 画质控图 失控结果的分析与处理,22,质控品的选择与准备,与待检样品的性
10、质相同或是相似 均匀恒定，最少使用半年 瓶间变异应该小于分析系统的变异 可采用商品的，也可使用实验室自制 其浓度与含量应该可以反映临床意义的范围 不能作为校准物使用,23,质控品的检测频率,在每一个项目的分析批次内必须做一次质控检测 仪器或试剂厂家应该对质控项目的检测频率作出相应的指导 用户可以根据不同的情况增加或减少频率,24,质量控制规则,通过检查质控数据作出有效的判断 指控界限的使用一般是均值与不同倍数的标准差。 如：2倍内认可，1-3倍超控.3倍外失控,25,标准质控图,26,失控的处理与分析,通过原始数据初步估计失控的原因 对具体的检测过程做回顾分析 通过有选择性的复查进一步判断失控
11、的原因并找出处理的办法,27,全自动生化分析仪使用过程中常见的问题,携带和交叉污染 多数一起存在的问题 常规工作中容易被忽视 引起不确定性的因素比较多,28,携带和交叉污染产生的原因,公有化：一台仪器检测多个项目共有一个探针、样品针、搅拌器和管道 随着生化仪处理能力的提高一台仪器上所做的项目与方法学也很多 使用不当：操作人员使用生化仪或进行的保养时方法不当，导致仪器及管道污染。 仪器老化：使用时间过长，部件老化冲洗站功能下降 清洗液使用不当 检测项目排列不合理：由于试剂组成成分会影响千货检测项目的结果。,29,携带污染的检测与计算, 高值水平 生理盐水 1:1000稀释的样本 共检测29次盐水
12、的均值为A，稀释后样本为B 交叉污染率=（A/B*1000）*100% 判断标准，0.3%为正常,30,携带和污染常见的组合I,ALT(IFCC)AST(IFCC)试剂中含有高活力的LDH成分，对LDH的检测可能带来干扰 ALP (IFCC) CK(NAC)CK-MB(NAC)CO2(PEPC)AMY(EPS)等试剂中含有Mg2+，对Mg2+的检测带来影响,31,携带和污染常见的组合II,磷酸盐缓冲液可能对CHE CHO GLU UA HBDH带来污染 CK试剂中含有GLU的成分，若是下一测试是glu就会有影响 胆固醇试剂中含胆酸盐，会对总胆汁酸的检测带来影响 淀粉酶试剂含有钙离子会影响离子钙
13、的检测,32,携带和污染常见的组合III,钒氧化法检测胆红素不能排在富有碱性试剂测定的项目之后，如：ALB ALP Ca Mg Cr等 过氧化物酶反应系统的测定项目不要排在一起，因为基于Trinder反应的高含量测定项目和低含量的测定项目之间有交叉污染。,33,解决方案,正确的安装操作规程维护和保养仪器，并定期评估 熟知各种试剂的组成成分正确排列顺序把容易受到干扰的排在最前面 规定解决方法：如变换试剂位、选择特殊的清洗剂，则加洗涤次数。,34,常用的排列顺序,ALT AST ALP GGT CHE TP ALB TBil DBil UA CR CK CK-MB HBDH LDH GLU TG
14、CHO HDL apoA1 apoB AMY CO2 P Ca Mg2+ CL,35,保养,日、周、月、季、年。,36,硬件设施,纯水机 Ups电源 外接电脑 废液排放管道 实验室环境：温度、湿度最重要，要有每天的工作记录,37,日维护,室内环境因素要符合仪器要求 正常开关机 日常清洗仪器及管道 检测试剂量 表面清理 （以上均应该每天做到）,38,周维护,加强冲洗：应用酸液或碱液或是交替对仪器管道进行冲洗 光路校正及空白检测：清洗光路，对比色杯进行空白检测 样本针和试剂针的手工清洗：除去表面的残留蛋白物质。,39,月维护,比色杯样本针搅拌器冲洗站的维护 技术人员完成 季保养与年保养 工程师完成：主要涉及一些老化的部件更换。,40,Thank you！,END,
