实验二：神经干动作电位的测定一、实验目的1学习神经十标本的制备2学习电生理实验的操作方法3、观察蛙坐骨神经干复合动作电位的波形，并了解其产生的基本原 理二、实验原理神经干在受到有效刺激后，可以产生相应的动作电位， 这标志着神经发生了兴奋如果在神经干的另一端引导传来的兴奋冲动，可以产生双相动作电位；如果在两个引导电极之间将神经麻醉或损坏，则引导出的动作电位即为单相动作电位神经细胞的动作电位是以“全或无”的方式产生的蛙的坐骨神经干是由很多不同类型的神经纤维组成的，因此神经干的动作电位是复合动作电位复合动作电位的幅值在一定的刺激强度下是随着刺激强度的变 化 而变化的三、实验材料和器械青蛙；常用手术器械、计算机采集系统、神经屏蔽盒、固 定针、蜡盘、培养皿、污物缸、棉线、纱布、滴、任式液管四、实验方法和步骤1•制备蟾赊坐骨神经干标本(1)毁脑脊髓和下肢标本制备2)剥皮的下肢标木俯卧于蛙板上，用尖头银子夹住紙骨尾端稍向 上提，使舐部向上隆起，用粗剪刀水平位剪除紙骨3)标本仰卧置于蛙板上，用玻璃分针分离脊柱两侧的坐骨神经, 穿线，紧靠脊柱根部结扎，近中枢端剪断神经用尖头银子夹结扎线将神经干从 紙部剪口处穿出。
4)标本俯卧位置于蛙板上，使其充分伸展呈人字形，用三根大头 针将标本钉在蛙板上然后再用玻璃分针循股二头肌和半膜肌之间的坐骨神经沟，纵向分离暴露坐骨神经大腿部分， 直至分离至胭窝胫腓神经分叉处,用玻璃分针将腓浅神经、胫神经与腓肠肌和胫骨前肌分离，将腓肠肌剪除5)用手轻提一侧结扎神经的线头，辨清坐骨神经走向，置剪刀于 神经与组织之间，剪刀与下肢成30角，紧贴股骨，胭窝，顺神经走向，剪切直至跟腱并剪断跟 腱和神经6)用手捏住结扎神经的线头，用银子剥离附着在神经干的组织, 将剥离出来的处骨神经干标本浸入盛有任氏液培养皿中待用・系统连接和仪器参数设置)系统连接：连接牛物信号采集处理系统和神经屏蔽盒，须避免 连接错误或连接不良2)RM6240m 点击理菜農 删伽再皴静中的沁f动作电位项目，系统进入■炭蜩言号记W态 仪器埶 第TffiWf晩徴0.020.002s滤波频率1kHz灵敏度5mV,采样频率40kHz扫描速度0.5ms/divO■W熾軾朿熾漲0.13V,刺激波宽0.1ms,延时5mso3•实验记录和观察(1)神经干标本的兴奋性用蹑子夹持神经干扎线，将神经干移入 屏蔽盒内，中枢端置瑚轍瞬b ZWO 鯛柞雎傅礎槪、馳槪、引导电极均接触毁T。
盖苗刺綢乐赠訓动饨色如栽嗣钝位干与电极接触良好，可能是神经干标本本身没有兴奋性，应该更 换神经干2)惬T兴奋姻颁定東蜩度从0.1V那台逐酬郸鉀瞬度 驾怦臟动作电位时的刺激强度，即为神经干的兴奋阈值3)双向动作电位在刺激阈值的基础上逐渐加大刺激强度，可见 动作电位的图形为双相，而且其幅值随刺激强度的增大而增大当刺激增加到一定的强度时,可见动作电位的幅值不再增大4）动作电位参数的测量对记录的双相动作电位进行测量，得出 双相动作电位的波幅、波宽和潜伏期五、实验图表、数据记录和处理表一末梢端引导引导时的阈刺激强度和最大刺激强度阈刺激强度（V）最大刺激强度（V末梢端引导peripheral end0.390.99表二末梢端引导和中枢端引导时各动作电位参数值 最大值（mV）最小值（mV）正相时程（ms负相时程（ms)末梢端引导peripheral end0.9970.3911.251.65枢端引central end1.3920.741.252.05图表1刺激强度与动作电位振幅强度的关系实验中， 在末梢端巧I导和中枢端y I导时,阈刺激和最大刺激时所得到的波形见实验报告最后的附图；而每个小组实验数据的汇总以及相关的分析处理也 附在了报告的最后；六、实验讨论1、神经干的双相动作电位是神经冲动先后通过两个引导电极形成的，冲动通过第1个电极，形成动作电位的正相波，冲动通过第2个电极，形成动作电位的负相波。
刺激电压从阈值增加至最大值，神经干动作电位振幅随刺激电 压增加而增高神经干动作电位不具有U全或无553、刺激蟾赊处骨神经干中枢端，可在其末梢端引导出动作电位, 反之也然，由此可以证明离体蟾赊坐胃神经具有双向传导兴奋的能力4、由各组实验汇总的数据分析无论是从末梢段引导还是从中枢端 引导，所得到的波形的正向振幅均大于负向振幅， 而正向时程均小于负向时程两引导电极处神经纤维的多寡不是形成止相振幅大于负相振幅和止相时程小于负相时程的主要原因七、实验注意事项1.剥制神经标本时要仔细，须将神经周围的结缔组织去干净，避免与 金属接触和戳伤神经标本2.神经标本必须与五根电极良好接触3.神经干在空气中不可暴露过久，应时常用任氏液润湿，但不可向神经盒内滴加任氏液4.神经干要伸直，防止弯曲，折叠和贴附两对引导电极间距离应尽可能大6.川刚能使神经干产生最大动作电位的最大刺激强度刺激神经7.盖上神经盒的做，憫也，防止干扰O8•如果在显示窗上发现动作电位图形倒置，交换引导电极的位置 即可八、思考题1、神经干动作电位的上、下相图形的幅值和波形宽度为什么不对 称？答:导 正復极化慮唤波城化I妁影血相阍3波 形上看上去，正相波波宽变窄，波幅较长，而负相波则正好相反。
2、测量出的神经干动作电位幅值和图形为什么与细胞内记录的不 一样？3、为何双相动作电位的幅值比较小?■答：这是因为负相波的存在，使双相动作电位正相波的时程和振幅减 小移动正引导电极，增加两电极距离，在一定范围内双相动作电位的正相波的振幅和时程均增大由此可以推测，正相波与负相波在时间轴上重叠，正相波和负相波叠加正是由于这种波的相互叠加（可以理解为波峰和波谷的部分叠加）导致了双相动作电位振幅较单相的动 作电位小4、在刺激电极与引导电极间接入地电极，对动作电位和实验记录 有无影响?■实验目的：1.观察蛙处骨神经干复合动作电位的基本波形，并了解其产生的基 本原理2.学习测定蛙或蟾赊离体神经干上神经冲动传导速度的方法和原 理实验材料：虎纹蛙，常用手术器械，PC机，信号采集处理系统，电子刺激器，神经屏蔽盒实验方法：1.虎纹蛙坐骨神经干的标本制备参照实验2-1的方法剥离蛙的坐骨神经干，尽量把神经干标本剥离得长一些，要求上自脊髓附近，下沿腓神经与胫神经一直分离到踝关节附近；尽量把神经干周围的组织剔除干净，剥离时切勿损伤神经干标本2.实验装置的连接按照图2-3-1将神经屏蔽盒与信号采集处理系统连接，屏蔽盒的地线良好接地。
3.仪器的操作和实验参数的设置1)本实验在Windows界面的生理米集处理系统平台下进行，打开生理采集系统2)采样窗参数的设置刺激参数的设置4.将蛙的坐骨神经干标本置于屏蔽盒内的电极上，神经干的中 枢端置于刺激电极一侧，从末梢端引导动作电位5.刺激、观察、记录神经干复合动作电位(1)神经干兴奋阈值的测定在刺激阈值的基础上逐渐加大刺激强度,可见动作电位的图形为双向，而且它的幅值随刺激强度的增大而加大当刺激增加到一定强度时，可见动作电位的幅值不再增大3)动作电位参数的测量4) 在两个引导电极之间损伤神经干标木,即可使原来的双相动作电位的下相消失，变为单相；注意上相动作电位的图形有什么样的变化5）选取最为理想的动作电位图形，打印出來，附于实验报告上实验结果：图1虎纹蛙处骨神经干的复合动作电位（双向动作电位）图2虎纹蛙坐骨神经T的复合动作电位（单向动作电位）结果分析：神经干在受到有效刺激以后可以产生复合动作电位，标志着神经 发生兴奋在离体神经干的一端施加刺激，从另一端引导传来的兴奋冲 动，可以记录出双相动作电位，如图1所示而且它的幅值随刺激强度的增大而加大当刺激增加到一定强度时，可见动作电位的幅值不再增大。
2、在引导的两个电极之间将神经干麻醉或损坏，阻断其兴奋传导能力， 这时候记录出的动作电位就成为单相动作电位，如图所示神经细胞的动作电位是页全或无方式发生的但是复合动作电位的幅值在一定刺激强度下是随刺激强度的增人而增人的。